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保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
1.染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。需要长期保存可以分装后-20℃保存。
2.试剂拆封后请尽快使用完！
2.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
含有偏振检测装置的设备
适用样本
细菌
仪器准备
1. 含有偏振检测装置的设备：荧光分光光度计/酶标仪等
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
试剂准备
1. PBS缓冲液
2. 生理盐水
2. 生理盐水
耗材准备
1. 离心管
2. 避光离心管 / EP 管
3. 吸头
4. 一次性手套
5. 荧光检测专用的黑色细胞培养板
2. 避光离心管 / EP 管
3. 吸头
4. 一次性手套
5. 荧光检测专用的黑色细胞培养板
使用注意事项
1. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.细菌处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细菌。
4.染色后立即进行分析。
2.染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.细菌处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细菌。
4.染色后立即进行分析。
使用方法
电子版仅供参考，最终以试剂盒里的纸质说明书为准!
细菌样品准备
1. 细菌培养：
将目标细菌接种至新鲜培养基，37℃振荡培养至对数生长期。
2. 细菌收集：
取 10-20 mL 菌液，4℃、5000×g 离心 10 分钟，弃上清；
3. 细菌洗涤：
用预冷的 PBS 缓冲液重悬沉淀，重复离心洗涤 2 次，去除培养基中残留；
4. 菌悬液稀释：
用 PBS 将细菌重悬至终浓度为 OD₆₀₀=0.3-0.8，置于 37℃恒温孵育 5 分钟，恢复膜活性。
染色工作液的配制：
用稀释液B将T62探针100倍稀释，再用PBS或者生理盐水5-10倍稀释，配制成T62染色工作液。
样品染色：
1. 用染色工作液重悬细菌，在37℃孵育15-30 分钟。
2. 用pH7.4 PBS洗涤细菌2次。
3. 用pH7.4 PBS重悬细菌。
4. 用该细菌进行检测荧光。
激发波长 358 nm，发射波长428 nm。
结果判断：
P值（r 值）越大，膜流动性越小；P值（r 值）越小，流动性越大。
若实验组P值（r 值）显著高于对照组：说明细菌细胞膜流动性降低；
若实验组P值（r 值）显著低于对照组：说明细菌细胞膜流动性升高。
细菌样品准备
1. 细菌培养：
将目标细菌接种至新鲜培养基，37℃振荡培养至对数生长期。
2. 细菌收集：
取 10-20 mL 菌液，4℃、5000×g 离心 10 分钟，弃上清；
3. 细菌洗涤：
用预冷的 PBS 缓冲液重悬沉淀，重复离心洗涤 2 次，去除培养基中残留；
4. 菌悬液稀释：
用 PBS 将细菌重悬至终浓度为 OD₆₀₀=0.3-0.8，置于 37℃恒温孵育 5 分钟，恢复膜活性。
染色工作液的配制：
用稀释液B将T62探针100倍稀释，再用PBS或者生理盐水5-10倍稀释，配制成T62染色工作液。
样品染色：
1. 用染色工作液重悬细菌，在37℃孵育15-30 分钟。
2. 用pH7.4 PBS洗涤细菌2次。
3. 用pH7.4 PBS重悬细菌。
4. 用该细菌进行检测荧光。
激发波长 358 nm，发射波长428 nm。
结果判断：
P值（r 值）越大，膜流动性越小；P值（r 值）越小，流动性越大。
若实验组P值（r 值）显著高于对照组：说明细菌细胞膜流动性降低；
若实验组P值（r 值）显著低于对照组：说明细菌细胞膜流动性升高。
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