bestbio@163.com
服务热线：021-33921235
登录
说明书下载
产品概述
product description
BBcellProbe® M73为疏水性探针，可自发嵌入细胞膜脂双层的疏水核心区域，芘分子的荧光特性与分子间碰撞概率高度相关，而碰撞概率由细胞膜流动性决定，当膜流动性高时，膜脂分子运动快，嵌入的探针分子在脂质双层中的侧向扩散速度加快、碰撞概率增加，两个激发态的芘单体结合形成激基缔合物（Excimer）；当膜流动性低时（扩散慢），膜脂分子运动受限，探针碰撞减少，主要以荧光单体（Monomer） 形式存在；芘单体和激基缔合物具有不同的特征荧光发射峰，通过检测单体与激基缔合物的荧光强度比，可反映细胞膜流动性变化
保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。需要长期保存可以分装后-20℃保存。
2.试剂拆封后请尽快使用完！
2.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
荧光分光光度计/酶标仪等
适用样本
细菌
仪器准备
1. 含有相应波长的设备：荧光分光光度计/酶标仪等
2. 紫外-可见分光光度计（OD₆₀₀）
3. 离心机
4. 移液器
5. 冰箱
6. 冰盒
2. 紫外-可见分光光度计（OD₆₀₀）
3. 离心机
4. 移液器
5. 冰箱
6. 冰盒
试剂准备
1. PBS缓冲液
2. 生理盐水
2. 生理盐水
耗材准备
1. 离心管
2. 避光离心管 / EP 管
3. 吸头
4. 一次性手套
5. 荧光检测专用的黑色细胞培养板
2. 避光离心管 / EP 管
3. 吸头
4. 一次性手套
5. 荧光检测专用的黑色细胞培养板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.细菌处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细菌。
4.染色后立即进行分析。
2.染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.细菌处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细菌。
4.染色后立即进行分析。
使用方法
电子版说明书仅供参考，最终以试剂盒里的纸质说明书为准！
细菌样品准备
1. 细菌培养：
将目标细菌接种至新鲜培养基，37℃振荡培养至对数生长期。
2. 细菌收集：
取 10-20 mL 菌液，4℃、5000×g 离心 10 分钟，弃上清；
3. 细菌洗涤：
用预冷的 PBS 缓冲液重悬沉淀，重复离心洗涤 2 次，去除培养基中残留；
4. 菌悬液稀释：
用 PBS 将细菌重悬至终浓度为 OD₆₀₀=0.3-0.8，置于 37℃恒温孵育 5 分钟，恢复膜活性。
染色工作液的配制：
用稀释液B将M73探针100倍稀释，再用PBS或者生理盐水5-10倍稀释，配制成M73染色工作液。
样品染色：
1. 用染色工作液重悬细菌，在37℃孵育30-60 分钟。
2. 用预热的pH7.4 PBS洗涤细菌2次。
3. 用预热的pH7.4 PBS重悬细菌。
4. 用该细菌进行检测荧光。
激发波长（Ex）：343-350 nm；
发射波长（Em）：400 nm（IM）、470 nm（IE） 处的荧光强度值。
结果判断：
IE/IM比值越低 → 细菌细胞膜流动性越低；
IE/IM比值越高 → 细菌细胞膜流动性越高。
细菌样品准备
1. 细菌培养：
将目标细菌接种至新鲜培养基，37℃振荡培养至对数生长期。
2. 细菌收集：
取 10-20 mL 菌液，4℃、5000×g 离心 10 分钟，弃上清；
3. 细菌洗涤：
用预冷的 PBS 缓冲液重悬沉淀，重复离心洗涤 2 次，去除培养基中残留；
4. 菌悬液稀释：
用 PBS 将细菌重悬至终浓度为 OD₆₀₀=0.3-0.8，置于 37℃恒温孵育 5 分钟，恢复膜活性。
染色工作液的配制：
用稀释液B将M73探针100倍稀释，再用PBS或者生理盐水5-10倍稀释，配制成M73染色工作液。
样品染色：
1. 用染色工作液重悬细菌，在37℃孵育30-60 分钟。
2. 用预热的pH7.4 PBS洗涤细菌2次。
3. 用预热的pH7.4 PBS重悬细菌。
4. 用该细菌进行检测荧光。
激发波长（Ex）：343-350 nm；
发射波长（Em）：400 nm（IM）、470 nm（IE） 处的荧光强度值。
结果判断：
IE/IM比值越低 → 细菌细胞膜流动性越低；
IE/IM比值越高 → 细菌细胞膜流动性越高。
常见问题分析
背景荧光过高，光谱基线杂乱的原因：
1.游离探针未洗去；
2.探针光漂白；
3.缓冲液有荧光杂质.
解决方法：
1.增加洗涤次数至 3~4 次；
2.加快检测速度；
3.更换荧光级试剂，重新配制PBS
1.游离探针未洗去；
2.探针光漂白；
3.缓冲液有荧光杂质.
解决方法：
1.增加洗涤次数至 3~4 次；
2.加快检测速度；
3.更换荧光级试剂，重新配制PBS
-
优惠促销Promotion
-
轻松下单Order
-
在线留言Online message
-
帮助中心Help center