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保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1. 避免反复冻融。可以根据需要分装后冻存。
2. 探针液为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3. 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4. 试剂拆封后请尽快使用完！
2. 探针液为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3. 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4. 试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
荧光分光光度计/荧光酶标仪/流式细胞仪等
适用样本
细胞
产品特点
1. 非放射性。
2. 使用方便：可用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测或激光共聚焦显微镜直接拍照分析；
3. 背景低，灵敏度高；
4. 线性范围宽，使用方便。
2. 使用方便：可用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测或激光共聚焦显微镜直接拍照分析；
3. 背景低，灵敏度高；
4. 线性范围宽，使用方便。
仪器准备
1. 荧光分光光度计或荧光酶标仪，
流式细胞仪、激光共聚焦、荧光显微镜等
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
流式细胞仪、激光共聚焦、荧光显微镜等
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
试剂准备
1. PBS缓冲液或者HBSS
2. 外排受体
3. 去脂蛋白血清
2. 外排受体
3. 去脂蛋白血清
耗材准备
1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 荧光专用黑色96孔板
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 荧光专用黑色96孔板
使用注意事项
1. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2. BBcellProbe® C71荧光探针在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3. 本荧光探针在冬季气温较低时在室内时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4. 使用前，先将本品取出回温至室温（20℃以上），并对其进行简短离心使溶液集中于管底。
5. 荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
2. BBcellProbe® C71荧光探针在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3. 本荧光探针在冬季气温较低时在室内时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4. 使用前，先将本品取出回温至室温（20℃以上），并对其进行简短离心使溶液集中于管底。
5. 荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
使用方法
电子版仅供参考，最终以试剂盒的纸质说明书为准！
探针染色工作液配制：
根据样本数量，用HBSS将BBcellProbe® C71荧光染料1000-2000倍稀释，配制成探针染色工作液。
探针标记
1. 培养板/培养皿准备细胞样本。
2. 待细胞生长到合适丰度，去除细胞培养基，用PBS洗细胞一次。
3. 加入适量体积37℃预热的含C71探针工作液。
4. 在37℃细胞培养箱内于生长状态下避光孵育2-24小时。
5. 移除染色液，用PBS（pH7.4）洗涤细胞3次。以充分去除未进入细胞内的C71探针。
6. 加入无血清培养基，再孵育30分钟至1小时，使细胞内的胆固醇各区域分布达到平衡。
胆固醇外排诱导
1. 更换外排培养基：
实验组：加入含有胆固醇接受体（如待测血清（例如，2.5%）或HDL（常用终浓度50 µg/mL）/ apoA-I（常用10-20 µg/mL））的无血清培养基。
空白对照组：只加入无血清培养基（不含外排受体，用于测定基础外排）。
最大外排对照组（选做）：可加入含有β-环糊精的培养基（能强力剥离细胞膜上的胆固醇，用于测定总可外排池）。
2. 外排孵育：在37°C、5% CO₂的培养箱中避光继续孵育4-24小时（时间可根据实验条件优化）。
检测与数据分析
1. 样本收集：
培养基上清：小心地将各孔中的培养基收集到新的96孔板或离心管中。
细胞裂解物：向原培养板中加入一定量的细胞裂解液B，室温孵育20-30分钟，使细胞完全裂解。
2. 荧光检测：
使用荧光酶标仪进行检测。
检测波长：激发光~488 nm，发射光~510 nm。
分别测定每个孔的培养基上清荧光值 和细胞裂解物荧光值。
探针染色工作液配制：
根据样本数量，用HBSS将BBcellProbe® C71荧光染料1000-2000倍稀释，配制成探针染色工作液。
探针标记
1. 培养板/培养皿准备细胞样本。
2. 待细胞生长到合适丰度，去除细胞培养基，用PBS洗细胞一次。
3. 加入适量体积37℃预热的含C71探针工作液。
4. 在37℃细胞培养箱内于生长状态下避光孵育2-24小时。
5. 移除染色液，用PBS（pH7.4）洗涤细胞3次。以充分去除未进入细胞内的C71探针。
6. 加入无血清培养基，再孵育30分钟至1小时，使细胞内的胆固醇各区域分布达到平衡。
胆固醇外排诱导
1. 更换外排培养基：
实验组：加入含有胆固醇接受体（如待测血清（例如，2.5%）或HDL（常用终浓度50 µg/mL）/ apoA-I（常用10-20 µg/mL））的无血清培养基。
空白对照组：只加入无血清培养基（不含外排受体，用于测定基础外排）。
最大外排对照组（选做）：可加入含有β-环糊精的培养基（能强力剥离细胞膜上的胆固醇，用于测定总可外排池）。
2. 外排孵育：在37°C、5% CO₂的培养箱中避光继续孵育4-24小时（时间可根据实验条件优化）。
检测与数据分析
1. 样本收集：
培养基上清：小心地将各孔中的培养基收集到新的96孔板或离心管中。
细胞裂解物：向原培养板中加入一定量的细胞裂解液B，室温孵育20-30分钟，使细胞完全裂解。
2. 荧光检测：
使用荧光酶标仪进行检测。
检测波长：激发光~488 nm，发射光~510 nm。
分别测定每个孔的培养基上清荧光值 和细胞裂解物荧光值。
常见问题分析
如何设置对照？
以下对照供参考
空白对照：只有细胞和无血清培养基，用于扣除非特异性泄漏。
阳性对照：使用已知效果的药物（如LXR激动剂T0901317）预处理细胞，以确认实验系统的可靠性。
无细胞对照：只有装载液，用于确认洗涤是否彻底。
以下对照供参考
空白对照：只有细胞和无血清培养基，用于扣除非特异性泄漏。
阳性对照：使用已知效果的药物（如LXR激动剂T0901317）预处理细胞，以确认实验系统的可靠性。
无细胞对照：只有装载液，用于确认洗涤是否彻底。
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