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产品概述
product description
贝博®BBproExtra®革兰氏阳性菌总蛋白裂解液可以从各种革兰氏阳性菌菌体中提取总蛋白，试剂盒适用各种革兰氏阳性菌以及各种厚壁菌体的蛋白提取，也可用于纯化蛋白的粗
品制备及总蛋白制备：提取过程简单方便。
本试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gelshift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
保存温度
2-8℃
有效期
一年
适用样本
革兰氏阳性菌
产品特点
1.使用方便：不需昂贵设备。
2.可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。
3.将蛋白提取的时间缩短至1小时。
4.采用温和的中性裂解组分，保持蛋白活性。
5.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳
2.可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。
3.将蛋白提取的时间缩短至1小时。
4.采用温和的中性裂解组分，保持蛋白活性。
5.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
7.超声细胞破碎仪
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
7.超声细胞破碎仪
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷：所有器具须放-20℃C冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
5.本试剂盒中提取液和蛋白酶抑制剂中均不含EDTA，根据需要可自行加入。
2.实验过程中的所有试剂须预冷：所有器具须放-20℃C冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
5.本试剂盒中提取液和蛋白酶抑制剂中均不含EDTA，根据需要可自行加入。
使用方法
1．提取液的准备：
根据所需要提取的样本量，每500μl提取液A中加入1p蛋白酶抑制剂和10p蛋白稳定液，充分混匀后置冰上备用。
2. 在4C，10000×g条件下将菌液离心5分钟，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。
3.用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。
4.按每100mg湿重菌体样本加入500μl蛋白提取液，吹打混匀，37°C水浴/气浴30-60分钟。
5.在150-300w，10s超声/10s间隔条件下冰浴超声至菌液变澄清。
6.在4℃，12000×g条件下将提取液离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
7．将上清移入另一干净离心管，即得革兰氏阳性菌蛋白样品。
8.将总蛋白样品定量后分装置于-80°C冰箱备用或直接用于下游实验。
根据所需要提取的样本量，每500μl提取液A中加入1p蛋白酶抑制剂和10p蛋白稳定液，充分混匀后置冰上备用。
2. 在4C，10000×g条件下将菌液离心5分钟，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。
3.用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。
4.按每100mg湿重菌体样本加入500μl蛋白提取液，吹打混匀，37°C水浴/气浴30-60分钟。
5.在150-300w，10s超声/10s间隔条件下冰浴超声至菌液变澄清。
6.在4℃，12000×g条件下将提取液离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
7．将上清移入另一干净离心管，即得革兰氏阳性菌蛋白样品。
8.将总蛋白样品定量后分装置于-80°C冰箱备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。部分革兰氏阳性菌可能较难裂解，最好进行超声处理。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。部分革兰氏阳性菌可能较难裂解，最好进行超声处理。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。
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