植物细胞壁蛋白提取试剂盒（可溶性蛋白）

BB-312481
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产品概述 product description

贝博BBproExtra®植物细胞壁蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种植物样本中提取可溶性蛋白。提取过程简单方便。
本试剂盒用于提取游离于细胞壁基质的离子/氢键/疏水作用结合型蛋白，主要为通过静电作用结合纤维素/果胶的蛋白。需要提取共价结合型不溶性蛋白，如与细胞壁多糖／木质素共价连接的蛋白，可以选用贝博其他货号的试剂盒（相关产品：BB-312482）。
本试剂盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
植物
产品特点
1.使用方便
2.提取过程简单方便
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
使用方法
1．提取液准备：
每500μ冷的蛋白提取液C中加入2μ蛋白酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
2. 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的100-200mg鲜嫩植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎，加入500-1000μl提取液A后混匀。
3.冰浴条件用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
4.将匀浆液用细胞筛过滤。
5.滤液于4°C、1000×g离心10min，弃上清，留沉淀。
6.向沉淀中加入0.5mL预冷的细胞壁提取液，涡旋重悬，4°C、1000×g离心10min，弃上清，留沉淀。
7.用PBS或生理盐水洗涤沉淀。重复洗涤2-3次，至上清液无色透明。
8.沉淀用300-500μl蛋白提取液C重悬，在4°C振荡30分钟-2小时。
9.在4℃，12000×g条件下离心10-15分钟。
10.将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到植物细胞壁蛋白。
11.上述蛋白提取物请分装后于-80°C冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂C的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。

2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂C中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。
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