2-8℃ 保存

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.试剂拆封后请尽快使用完！

一年

动物细胞/组织

1.使用方便，从细胞，组织中提取脂筏不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.提取过程简单方便，将脂筏提取的时间缩短至1小时。

1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒

1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

1.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
2.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
3.如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
4.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
5.下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
6.Western Blot实验内参可以选用Flotillin-1/2、Caveolin-1、GM1。

电子版仅供参考，最终都以试剂盒里的纸质说明书为准！


细胞样本脂筏提取：
悬浮细胞脂筏提取：
1. 提取液准备： 每500 μl冷的脂筏提取液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物和2 μl磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取5×10（6次方）个细胞，在4℃，2,500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每5×10（6次方） -1×10（7次方）个细胞（大约50 mg细胞/50 μl细胞沉淀体积）中加入500 μl冷的脂筏提取液，吹打混匀后，在4℃条件下振荡30-60分钟，至细胞充分裂解，无明显细胞沉淀。
5. 提取液在4℃，1,000×g条件下离心10分钟。弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6. 上清在4℃，15,000×g-16, 000×g条件下离心30分钟。
7. 弃上清，沉淀即为脂筏。
8. 用适量下游应用兼容的缓冲液重悬脂筏。
9. 将上述脂筏提取物分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。


贴壁细胞脂筏提取：
1. 提取液准备：每500 μl冷的脂筏提取液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物和2 μl磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 小心吸取贴壁细胞的培养液。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干PBS。
4. 加入适量冷的脂筏提取液，振荡30-60分钟，至细胞充分裂解，用细胞刮刀刮一遍，将裂解液吸入另一干净离心管。
5. 提取液在4℃，1,000×g条件下离心10分钟。弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6. 上清在4℃，15,000×g-16, 000×g条件下离心30分钟。
7. 弃上清，沉淀即为脂筏。
8. 用适量下游应用兼容的缓冲液重悬脂筏。
9. 将上述脂筏提取物分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

组织样本总脂筏提取：
1. 提取液准备：
每500 μl冷的脂筏提取液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物和2 μl磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取50-100 mg组织样本，用PBS洗干净，然后用手术剪刀尽可能剪碎。
3. 加入500 μl冷的脂筏提取液，用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见固体。
4. 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃条件下振荡30-60分钟。
5. 提取液在4℃，1,000×g条件下离心10分钟。弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6. 上清在4℃，15,000×g-16, 000×g条件下离心30分钟。
7. 弃上清，沉淀即为脂筏。
8. 用适量下游应用兼容的缓冲液重悬脂筏。
9. 将上述脂筏提取物分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

脂筏浓度低？

处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致脂筏浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
脂筏丰度较低，需要足够的细胞/组织上样量才能有效提取得到足量脂筏，在条件允许的情况下，尽可能加大细胞/组织的上样量。